細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒

原理簡(jiǎn)介
*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質(zhì)，將DNA提取出來(lái)，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)
1．裂解液低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2．避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
3. RNaseA經(jīng)常使用可放2－8度保存，蛋白酶K請(qǐng)放－20度保存。

操作步驟
1．取100－300ul培養(yǎng)的細(xì)菌（如果細(xì)菌濃度很高，請(qǐng)減少細(xì)胞用量），12,000rpm，離心2分鐘，盡可能的吸凈上清。如果細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，請(qǐng)用溶菌酶處理，處理方法：稱取100mg溶菌酶，加入1ml 雙蒸水，溶解后，分裝成100ul/支，凍存，用時(shí)取出一支，直接加入*步收集的菌液中，重懸菌液，37度處理半小時(shí)，離心，去上清。如果為陰性菌，可跳過此步。
2． 加入200ul裂解液，立即震蕩混勻，可選做步驟：如需要去除RNA，可以加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
3．加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液，顛倒混勻，65℃放置10－30分鐘，期間顛倒3－5次，小心內(nèi)心管蓋受熱開啟。
4．在上清中加入三倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。
5．12000rpm離心5min，棄上清，沉淀加入1ml 70%乙醇，輕輕混勻，再次12000rpm離心5min，棄上清，將離心管在離心機(jī)中再次離心30S左右，吸去底部少量液體。
7．室溫放置2min左右，等沉淀邊緣微微發(fā)白，加入50－100ulTE緩沖液溶解，如很難溶解，可55℃水浴5分鐘。
8．電泳或者其他方法檢測(cè)，進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。