Brilliant Blue G

Brilliant Blue G

產(chǎn)品描述

考馬斯亮藍(lán)（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結(jié)構(gòu)上前者比后者多了2個(gè)甲基，命名上“G”為Green 的縮寫(xiě)，因G250的藍(lán)色染料泛淺綠色；命名上“R”為Red的縮寫(xiě)，因R250的藍(lán)色染料呈微紅色調(diào)；“250”表示考馬斯亮藍(lán)的純度。生化實(shí)驗(yàn)中常將考馬斯亮藍(lán)用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過(guò)與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團(tuán)間的靜電結(jié)合作用以及范德華力，考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)但非共價(jià)鍵連接的復(fù)合物。蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見(jiàn)的藍(lán)色。

考馬斯亮藍(lán)R250（Coomassie brilliantblue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達(dá)0.1μg蛋白。但是染色背景比較深，需要褪色后才能進(jìn)行蛋白條帶的觀察。考馬斯亮藍(lán)G250對(duì)蛋白膠染色的靈敏度相對(duì)較差，zui低檢測(cè)到0.5μg蛋白。但是因其在三氯酸中不溶而以膠體形式存在，選擇性的和蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，染色迅速，著色深的蛋白質(zhì)條帶數(shù)秒內(nèi)可以顯現(xiàn)出來(lái)，約45min后著色zui深。而且染色背景低，不需要脫色即可進(jìn)行蛋白條帶的觀察。因此，非常適合對(duì)電泳凝膠蛋白的快速定性分析。

考馬斯亮藍(lán)G250較多的用于溶液體系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白結(jié)合檢測(cè)法（Bradfordprotein-binding assay），此方法利用的就是G250與蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，Bradford試劑（也就是酸化的G250溶液）為陽(yáng)離子，主要為雙質(zhì)子化，溶液為紅色，其zui大吸收波長(zhǎng)（Amax）為470nm。當(dāng)與蛋白穩(wěn)定結(jié)合后，G250以陽(yáng)離子，非質(zhì)子化的形式存在，溶液變?yōu)樗{(lán)色，zui大吸收波長(zhǎng)遷移到595 nm。藍(lán)色陽(yáng)離子形式染料的量與樣本中蛋白的量成正比，因此通過(guò)直接測(cè)定595nm的吸光度來(lái)反映蛋白量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于G250與蛋白質(zhì)結(jié)合所需的時(shí)間較短（約2min左右），且結(jié)合的G250-蛋白質(zhì)復(fù)合物室溫下約1h內(nèi)保持穩(wěn)定。反應(yīng)靈敏度高，是一種非常常用的微量蛋白快速定量方法。

產(chǎn)品性質(zhì)